Toxin腸毒素的用途——作為超抗原

　　原理：葡萄球菌腸毒素屬于超抗原，能夠非特異性激活T細(xì)胞增殖并釋放過量細(xì)胞因子，可用于抗腫瘤治療。T細(xì)胞活化通過暴露于特定抗原（例如Toxin葡萄球菌腸毒素B(SEB)）來測(cè)定。SEB是一種細(xì)菌毒素，能夠與抗原呈遞細(xì)胞(APC)和TCR上的MHCII類分子結(jié)合，誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的釋放，例如IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ。

　　應(yīng)用舉例：誘導(dǎo)活化T細(xì)胞

　　一、將PBMCs（120 K/孔）與Nuclight綠色試劑標(biāo)記的Ramos細(xì)胞（40/孔）進(jìn)行共培養(yǎng)。使用CD3/CD28 Dynabead、CD3×CD19 BiTE抗體或Toxin葡萄球菌腸毒素B(SEB)誘導(dǎo)活化。在60 h時(shí)，使用T細(xì)胞活化分析試劑盒、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷分析試劑盒和T細(xì)胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合iQue®3系統(tǒng)分析10µL樣本。

　　每種活化因子會(huì)導(dǎo)致不同的CD3+T細(xì)胞蛋白表達(dá)和殺傷特征：

　　1.CD3/CD28 Dynabead誘導(dǎo)的T細(xì)胞活化呈現(xiàn)濃度依賴的特性。最高的微球數(shù)量對(duì)應(yīng)于最大的活化標(biāo)志物表達(dá)百分比。該結(jié)果與高水平的細(xì)胞耗竭標(biāo)志物呈現(xiàn)相關(guān)性。

　　2.與Dynabead和SEB相比，CD3×CD19 BiTE抗體介導(dǎo)的靶細(xì)胞死亡增量最多，活化和耗竭水平顯著降低。這說明BiTE介導(dǎo)的免疫細(xì)胞殺傷時(shí)間可能持續(xù)的較長(zhǎng)。

　　3.SEB刺激，即使在低濃度下，也可使T細(xì)胞活化并產(chǎn)生最大殺傷率，導(dǎo)致高水平的T細(xì)胞耗竭。
 

　　二、使用來自T細(xì)胞活化分析試劑盒、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷分析試劑盒和T細(xì)胞耗竭分析試劑盒的Qbeads測(cè)定Nuclight綠色標(biāo)記的Ramos和PBMC（3:1比例）共培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞因子的釋放數(shù)據(jù)。在多個(gè)試劑盒中均檢測(cè)了IFN?和TNFa的濃度，以便將所有試劑盒的測(cè)定結(jié)果取平均值。

　　各個(gè)活化因子對(duì)細(xì)胞因子分泌和對(duì)表面蛋白表達(dá)的影響相當(dāng)：

　　1.在使用的微球數(shù)量范圍內(nèi)，CD3/CD28 Dynabead誘導(dǎo)的細(xì)胞因子釋放呈濃度依賴性增加。

　　2.與微球或SEB相比，CD3×CD19 BiTE刺激后的細(xì)胞因子釋放始終較低（最高刺激濃度下的顆粒酶B濃度除外）。該結(jié)果表明，在降低毒性風(fēng)險(xiǎn)的情況下（例如細(xì)胞因子釋放綜合征），可以實(shí)現(xiàn)高水平的細(xì)胞殺傷。

　　3.SEB可誘導(dǎo)高水平的細(xì)胞因子釋放（即使在低濃度下）。
 

　　三、將PBMCs（25 K/孔）與貼壁AU565細(xì)胞（5 K/孔）進(jìn)行共培養(yǎng)。使用SEB誘導(dǎo)T細(xì)胞活化。在60 h時(shí)，使用T細(xì)胞活化分析試劑盒、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷和T細(xì)胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合iQue®3系統(tǒng)提取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞，進(jìn)行終點(diǎn)分析。

　　SEB活化誘導(dǎo)靶細(xì)胞殺傷呈濃度依賴性增加，伴隨CD3+T細(xì)胞上活化（CD69、CD25和HLA-DR）和耗竭（PD-1、LAG-3和TIM-3）標(biāo)志物的高表達(dá)（在所有使用的SEB濃度中均是如此）。
 

　　其他應(yīng)用：抗體制備、毒素檢驗(yàn)、多種免疫和偶聯(lián)試驗(yàn)、藥物研發(fā)等。