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酵母雙雜交文庫構(gòu)建技術(shù)服務(wù)

 更新時間:2019-02-20 點擊量:4150

酵母雙雜交文庫構(gòu)建技術(shù)服務(wù)介紹
酵母雙雜交技術(shù)產(chǎn)生以來,主要應(yīng)用在以下幾個方向:
1、檢驗一對功能已知蛋白間的相互作用。
2、 研究一對蛋白間發(fā)生相互作用所必需的結(jié)構(gòu)域。
3、 用已知功能的蛋白基因篩選雙雜交cDNA文庫,以研究蛋白質(zhì)之間相互作用的傳遞途徑。
4、分析新基因的生物學(xué)功能,即以功能未知的新基因去篩選文庫。通常依靠報告基因的轉(zhuǎn)錄激活來鑒定蛋白相互作用。將一個基因克隆到"誘餌"載體,并和GAL4蛋白的DNA結(jié)合域(DBD)表達(dá)為融合蛋白。將第二個基因或者編碼可能的相互作用子蛋白的cDNA文庫克隆到"獵物"載體,同GAL4的轉(zhuǎn)錄激活域(AD)表達(dá)為融合蛋白。當(dāng)兩個蛋白相互作用時,AD和DBD間距離被拉近,從而激活報告基因的表達(dá)。
本服務(wù)項目使用infusion重組系統(tǒng)進(jìn)行重組,使用zhuan利的cDNA合成方法進(jìn)行cDNA的合成。
實驗步驟
1.1.RNA提取
1.2.mRNA分離
1.3.cDNA合成(使用酶促法直接合成,不經(jīng)過PCR擴(kuò)增過程,比SMART方法質(zhì)量大大提高)
1.4.cDNA長度分級
1.5.分級后的cDNA與酵母雙雜載體(pGADT7、pGADT7-REc2、pDEST22、pB42AD、pPR3N等載體,或者客戶載體)進(jìn)行infusion重組。
1.6.重組后產(chǎn)物電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
1.7.文庫鋪板檢測與菌液保存
1.8.文庫質(zhì)粒提取
產(chǎn)品內(nèi)容
我們提供構(gòu)建好的酵母文庫的甘油菌液(含20%甘油的LB培養(yǎng)基),文庫甘油菌,隨機(jī)克隆子的PCR鑒定圖譜,文庫構(gòu)建報告,酵母雙雜交篩選相關(guān)細(xì)胞和質(zhì)粒。
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
3.1文庫庫容量:大于1*10^7CFU。
3.2平均插入片段:大于1.2Kbp。
3.3陽性率:大于95%。
服務(wù)時間
20個工作日內(nèi)
備注1:該酵母文庫可以選擇增加均一化處理步驟,我們使用DSN法均一化方法,可以構(gòu)建出高質(zhì)量的均一化酵母雜交文庫,可以大大減少后續(xù)酵母篩選的工作量和篩選效率等。
提供的產(chǎn)品
詳細(xì)的實驗報告
酵母雙雜交(酵母單雜交)文庫質(zhì)粒、菌液
備注2:如果客戶需要轉(zhuǎn)化酵母,我們可提供100管酵母甘油菌工作液及母液(同clontech)。
服務(wù)周期
獲得合格的總RNA后25工作日,如需轉(zhuǎn)化酵母延長15個工作日。
材料要求
客戶構(gòu)建的酵母雙雜交cDNA文庫,由客戶提供組織、細(xì)胞或總RNA給我們即可:細(xì)胞樣本:細(xì)胞數(shù)量大于1*10^7
動物樣本:大于1g
物樣本:大于2g
總RNA:大于200u
服務(wù)流程 
1、提交項目課題相關(guān)需求和資料。 
2、與我們的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊討論項目細(xì)節(jié)。 
3、根據(jù)討論后的意見對實驗方案進(jìn)行修改。 
4、雙方均滿意并達(dá)成一致,簽訂技術(shù)服務(wù)合同。 
5、開展實驗,按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。 
6、結(jié)題,提供實驗原始結(jié)果和分析結(jié)果、實驗流程、實驗條件等等。 
咨詢與訂購 
感謝您選擇我們的服務(wù),如果您有任何問題,請聯(lián)系我們,我們將竭誠為您解答和服務(wù)。

 

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